Jueves 14 de agosto de 2003 DIARIO OFICIAL (Primera Sección) 97
f) Filtrar una porción del líquido a través de papel filtro No. 4 o similar.
g) Conservar el filtrado (máximo 36 h a temperatura de refrigeración (2°C - 8°C)).
h) Todas las muestras deben ser cocidas, de lo contrario los extractos de muestras deben ser
calentadas en una baño de agua 95°C-100°C, durante 15 min, antes de la filtración.
A.1.5 Procedimiento
- Todos los reactivos deben ser atemperados antes de la prueba (25°C).
- Los reactivos deben ser mezclados por inversión. Nunca agitar vigorosamente.
- Una vez iniciada la determinación no puede interrumpirse hasta completar todos los pasos.
- Para evitar contaminaciones una punta de pipeta debe usarse para cada muestra y control. No deben
tocarse los pozos con las puntas de la pipeta o con los dedos.
- No mezclar el conjugado con el sustrato. Los tubos que contengan las soluciones del conjugado y del
sustrato deben conservarse por separado.
- Deben realizarse bien el lavado de los pozos de lo contrario, esto puede afectar adversamente a la
determinación.
Una vez que los reactivos están a temperatura y han sido preparadas las muestras proseguir de la
siguiente manera:
Preparar un layout de pruebas, que muestre los micropozos que se van usar para los controles y las
muestras que se van a trabajar, de tal forma que se determine el número de pozos para cada especie que
se desee probar, la ubicación y los volúmenes de muestra, controles y reactivos específicos para cada
especie durante el procedimiento.
A.1.5.1 Remover los micropozos de la bolsa y separar la cantidad de ellos que se requiere
colocarlos en el marco de acuerdo al layout, y volver a meter los cicropozos, que se van a
utilizar en las bolsas, colocando dentro el agente desecante.
A.1.5.2 Identifique las tiras en la parte inferior, y colóquelas así en el marco.
A.1.5.3 Usando la micropipeta
- Colocar 100µL de solución salina, en cada uno de los pozos seleccionados para el
blanco.
- Colocar 100 µL de control negativo, en cada uno de los pozos seleccionados para ello.
- Colocar 100 µL de control positivo al 1%, en cada uno de los pozos seleccionados
para ello.
- Colocar 100 µL de control positivo, en cada uno de los pozos seleccionados.
- Colocar 100 µL de cada uno de los extractos de las muestras, en cada uno de los pozos
seleccionados.
A.1.5.4 Mezclar suavemente con la mano y cubrir con un papel aluminio.
A.1.5.5 Dejar en reposo a temperatura ambiente durante 1 h.
A.1.5.6 Terminado el periodo de incubación, vacíe los pozos en una tarja, y cuidadosamente llene
todos los pocitos con la solución de lavado, usando una piceta.
A.1.5.7 Repetir el vaciado y el llenado de los pozos 2 veces más.
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